摘要:本实验根据中国药典2010版二部乳糖项下测试方法,采用高效液相色谱 (HPLC) 法结合示差折光检测器分离乳糖与蔗糖,并选择了4种不同类型的氨基柱对乳糖和蔗糖的保留及分离情况进行了考察。结果表明:流动相为乙腈:水=75:25(v/v),使用Innoval NH2色谱柱(5 μm,100Å,4.6×250 mm) 对两种物质的分离度为2.44,实现了乳糖和蔗糖的良好分离,且各物质峰形良好,保留时间稳定,能够满足药典要求。 关键词:高效液相色谱法;示差检测器;乳糖;蔗糖;氨基柱;
前言 乳糖是一种双糖,由一分子β-D-半乳糖和一分子α-D-葡萄糖在β-1,4-位形成糖苷键相连,有两种端基异构体:α-乳糖和β-乳糖,在水溶液中可互相转化。α-乳糖很容易结合一分子结晶水。乳糖甜度约是蔗糖的六分。蔗糖容易被酸水解,水解后产生等量的D-葡萄糖和D-果糖,其不具有还原性。发酵形成的焦糖可以用作酱油的增色剂。乳糖作为一种药用辅料,以填充剂或稀释剂的形式广泛应用于片剂、胶囊、颗粒剂和冻干产品中。然而,一般药用乳糖来源于牛奶,可能存在可引起过敏反应的杂蛋白。因此,2010版药典增加了乳糖的检查项内容。本实验以药典为依据,实现了乳糖与蔗糖的良好分离。
1 实验部分 1.1 仪器、试剂与材料 1.1.1 主要仪器设备 高效液相色谱仪,示差检测器 1.1.2 试剂材料 超纯水;乙腈(色谱纯);蔗糖和乳糖(客户提供,分别加水溶解并稀释成浓度为10 mg/mL的储备溶液) 色谱柱1-6:规格均为5 μm,100Å,4.6×250 mm 1.1.3 色谱条件 流动相:A-水,B-乙腈,A:B=75:25 (v/v); 流速:1.0 mL/min; 柱温:室温; 进样量:10 uL; 2 结果与讨论 本实验对比了六种色谱柱对乳糖及蔗糖的分离效果,由表1及图1-5可知,依据2010版药典,流动相为乙腈:水=75:25(v/v),柱温为室温时,采用Innoval NH2色谱柱分离效果,分离度为2.44。 表1. 不同氨基柱及HILIC色谱柱乳糖与蔗糖分离测试数据对比(乙腈:水=75:25) 色谱柱 | 柱温 | 组分名称 | 保留时间/min | 拖尾因子 | 分离度 | 色谱图 | 氨基柱A | 室温 | 乳糖 | 6.485 | 1.08 | — | 图1 | 蔗糖 | 7.135 | 1.00 | 1.18 | Innoval NH2 | 室温 | 乳糖 | 7.180 | 1.16 | — | 图2 | 蔗糖 | 8.707 | 1.22 | 2.44 | 氨基柱B | 室温 | 乳糖 | 8.750 | 1.05 | — | 图3 | 蔗糖 | 10.170 | 1.00 | 2.03 | 氨基柱C | 室温 | 乳糖 | 6.383 | 1.15 | — | 图4 | 蔗糖 | 6.983 | 1.09 | 1.15 | | | | | | | | | | | *氨基柱A,B, C为市售其他品牌色谱柱
图1 氨基柱A色谱柱对乳糖和蔗糖的分离图谱(室温)
图2 Innoval NH2色谱柱对乳糖和蔗糖的分离图谱(室温)
图3 氨基柱B色谱柱对乳糖和蔗糖的分离图谱(室温)
图4 氨基柱C色谱柱对乳糖和蔗糖的分离图谱 3. 结论 按照药典相关规定,采用Innoval NH2色谱柱(5um; 100Å; 4.6x250mm)对乳糖和蔗糖进行测定,色谱柱分离效果相对较好,二者分离度为2.44>1.5,能够满足药典要求。 4. 产品信息 产品名称 | 规格描述 | 包装数量 | 订货号 | Innoval NH2 | 5um,100Å;4.6×250mm | 1支 | IN852505-0 | 保护柱套 | 适用于4.6×10mm和2.1×10mm | 1支 | SH-100 | 直联式保护柱芯 | 5um,100Å;4.6×10mm | 4支/包 | IN850105-0S | 1.5 mL样品瓶 | 短螺纹透明带书写处 32×11.6 mm | 100/PK | 1109-0519 | 1.5mL样品瓶盖 | 9 mm中心孔蓝盖,红色橡胶/米色PTFE隔垫 45。Shore A 1.0 mm | 100/PK | 0915-1819 | 微孔滤膜 | 单膜,13 mm,0.45 μm | 100个/包 | AS021345-T | 一次性注射器 | 2 mL无针头 | 100支/包 | LZSQ-2ML | 乙腈UV级 | 4 L/瓶,色谱纯 | 4×4 L/箱 | 015-4 | 原创作者:济南赛畅科学仪器有限公司 |